关于基华

分子间互作的5大实验方法：①蛋白质-蛋白质   ②蛋白质-RNA   ③蛋白质-DNA   ④蛋白质-DNA/RNA     ⑤RNA-DNA

 

 

一、蛋白质-蛋白质

1.免疫沉淀（IP）

 

 

2.免疫共沉淀(co-IP)

 

 

3.GST pull-down

 

 

4.co-IP 和GST pull-down区别

①co-IP：研究的是体内自然状态下的蛋白质互相作用，反应的是比较真实的蛋白质相互作用，由于沉淀下来的是蛋白质复合物，不能显示蛋白质之间的相互作用是直接还是间接的。

 

 

②GST pull down：可以确定目的蛋白和检测蛋白是否发生直接相互作用，但是无法得知体内真实的结合情况；

 

 

 

 

二、蛋白质-RNA

1.蛋白质与RNA相互作用

①RNA结合蛋白

RNA结合蛋白

微小RNA结合蛋白（如，Ago2）

②RNA

mRNA、lncRNA、circRNA、micRNA

 

 

③RIP：以蛋白为主角，研究RNA与蛋白的互作

 

 

④RNA pulldown：以RNA为主角，研究其与蛋白的互作

 

  

2、RNA结合蛋白免疫沉淀技术(RIP)

 

 

3.RNA pull down

 

 

 

三、蛋白质-DNA

染色质免疫共沉淀技术(ChIP)

体内研究DNA与蛋白质作用反应细胞内转录因子与启动子Promoter的结合情况。

 

 

 

四、蛋白质-DNA/RNA

凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA)

 

 

五、荧光素酶实验

1.启动子活性研究

 

 

 

2.基因3’UTR区和microRNA结合实验